限制性內切酶如何切割？

這一過程需借助兩種酶：限制性核酸內切酶和DNA連接酶。

限制性核酸內切酶是可以識別特定的脫氧核苷酸序列，并在每條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵進行切割的一類酶，簡稱限制酶。

DNA連接酶利用NAD或ATP中的能量催化兩個核酸鏈之間形成磷酸二酯鍵。反應過程可分三步：

(1)NAD+或ATP將其腺苷酰基轉移到DNA連接酶的一個賴氨酸殘基的ε─氨基上形成共價的酶-腺苷酸中間物，同時釋放出煙酰胺單核苷酸(NMN)或焦磷酸。

(2)將酶-腺苷酸中間物上的腺苷酰基再轉移到DNA的5'-磷酸基端，形成一個焦磷酰衍生物，即DNA-腺苷酸;

(3)這個被激活的5'-磷酰基端可以和DNA的3'-OH端反應合成磷酸二酯鍵，同時釋放出AMP。